把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標記,以使濾膜與性自顯影片位置對應。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
預雜交
1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預雜交4小時以上。
雜交
1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。
注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結(jié)合越好,溫度越高,背景越小。
原位雜交技術在許多領域都有應用,以下是其中幾個具體應用:
細胞生物學和發(fā)育生物學:在細胞生物學和發(fā)育生物學領域,原位雜交技術常被用于研究基因的表達和定位。例如,通過標記特定基因的探針,可以在細胞或組織中檢測特定基因序列的存在和分布,進而了解基因在細胞分化、發(fā)育和功能中的作用。
基因組學和遺傳學研究:原位雜交技術也可用于基因組學和遺傳學研究。例如,通過標記多個基因探針,可以檢測基因組中的多個基因序列,從而進行基因定位、基因表達譜分析、基因突變檢測等研究。
病毒學和病原微生物研究:在病毒學和病原微生物學領域,原位雜交技術常被用于檢測和定位病毒、細菌等病原微生物。例如,通過標記特異性或核酸探針,可以檢測組織中病原微生物的存在、情況以及分布特征,從而為疾病的預防、診斷和提供依據(jù)。
總之,原位雜交技術在生物學、醫(yī)學、基因組學、遺傳學、病毒學和病原微生物學等領域都有廣泛的應用價值,為人類認識生命現(xiàn)象、探究疾病機制和提供了有力的技術支持。